联系方式
地址:上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
联系人:周经理
电话:021-67680335
手机:13052188602
邮箱:shlmai@163.com
网址:www.shlmai.com
葡萄糖脱氢酶(GCDH)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
418 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876740S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876740S
用途范围 GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,在340nm下测定NADH上升速率,即可反映GCDH活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

葡萄糖脱氢酶(GCDH)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,大量存在于高等动物的肝脏和弱氧化醋杆菌中。在低聚果糖生产中使用GCDH,不仅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量,而且生成的葡萄糖酸与钙离子结合生成的葡萄糖酸钙是一种理想的补钙制剂。因而,GCDH已成为制备高含量低聚果糖的理想用酶。

测定原理:

GCDH 催化 D-葡萄糖和 NAD 生成 D-葡萄糖酸和 NADH,在 340nm 下测定 NADH 上升速率,即可反映GCDH 活性。

需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 47.5 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

样本的前处理:
组织的前处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
细菌或培养细胞的前处理:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零;
2、 工作液的配制:临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、 将工作液置于 37℃预热 5 分钟。
4、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 工作液,立即混匀,记录 340nm 处初始吸光值 A1 和1min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
GCDH 活性计算:

(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=3215×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=6.43×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

联系方式
手机:13052188602
电话:021-67680335
Q Q:
手机访问官网
Copyright © 2022 上海联迈生物工程有限公司 XML 技术支持: 食品商务网   盖德化工网