β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GD)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：

β-GD 广泛存在于动物组织中，是一种参与肿 瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。该酶在肝细胞中含量较高。此外在胃 癌组织中含量丰富，测定胃 液 β-GD 活性对于研究胃 癌具有重要的意义。

测定原理：

β-GD 催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 5mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂三：液体 37.5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：1μmol/mL 标准储备液 10mL，4℃保存；
样品测定的前处理：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）

β-GD 活性计算：
（1）按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每 g 鲜重样品中催化产生 1μmol 酚酞的量为一个活力单位。
β-GD （ μmol/h/g 鲜 重 ） = (C 标 准 管 ×V1)× （ A 测 定 管 -A 空 白 管 ） ÷ （ A 标 准 管 -A 空 白 管 ）÷(W×V1÷V2)÷T=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每 mg 组织蛋白催化产生 1μmol 酚酞的量为一个活力单位。
β-GD （ μmol/h /mg prot ） = (C 标 准 管 ×V1)× （ A 测 定 管 -A 空 白 管 ） ÷ （ A 标 准 管 -A 空 白 管 ）÷(V1×Cpr)÷T=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr
C 标准管：标准管浓度， 1μmol/mL；V1：加入样本体积：0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。