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滤纸酶测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1142 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/48S
  • 货号:LM-876746S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876746S
用途范围 滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物,在540nm处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/48S
是否进口

滤纸酶测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系,能水解纤维素 β-1,4 葡萄糖苷键生成葡萄糖,研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。

测定原理:

滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物,在 540nm 处有 光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 40mL×1 瓶,4℃保存。
滤纸条:50mg×50 条。
酶液提取:
1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 蒸馏水)加入蒸馏水,冰浴匀浆后于 4℃,12000rpm 离心 10min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 4℃,12000rpm离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体:直接检测。
测定操作:
1. 根据样本数量取两倍数量的滤纸条和 Ep 管,每支 Ep 管中放入一个卷状滤纸条(注意要放入底部),作为底物。
2. 对照管:取 200μL 灭活的酶液,加入 500μL 试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的 Ep 管中,标注为对照管。
3. 测定管:取 200μL 酶液,加入 500μL 试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的 Ep 管中,标注为测定管。
4. 对照管和测定管同时置于 50℃水浴锅中反应 30min。
5. 加入 800μL 试剂二,沸水浴 5min,自来水冷却后取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中测定 540nm 处吸光值,分别记为 A 对照管和 A 测定管,△A= A 测定管- A 对照管。
酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.2805x - 0.0255,R2 = 0.9991

(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每毫克蛋白每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/mg prot)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 0.891×(△A+0.0255)÷ Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每克组织每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/g)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 0.891×(△A+0.0255)÷ W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每毫升培养液每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/mL)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V 反总÷V 样÷T= 0.891×(△A+0.0255)
(4)按细胞数量计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每 104 个细胞每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/104cell)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V 反总÷(V 样×细胞数量(万个)÷V 样总)÷T= 0.891×(△A+0.0255)÷ 细胞数量(万个)
V 反总:反应总体积,1.5mL,V 样:反应体系中加入样本体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;
Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1403x - 0.0255,R2 = 0.9991
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每毫克蛋白每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/mg prot)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T=1.782×(△A+0.0255)÷ Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每克组织每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/g)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 1.782×(△A+0.0255)÷ W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每毫升培养液每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/mL)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V 反总÷V 样÷T= 1.782×(△A+0.0255)
(4)按细胞数量计算
酶活性定义:在 50℃,pH4.6 条件下,每 104个细胞每分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/104cell)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V 反总÷(V 样×细胞数量(万个)÷V 样总)÷T= 1.782×(△A+0.0255)÷ 细胞数量(万个)
V 反总:反应总体积,1.5mL,V 样:反应体系中加入样本体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;
Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
注意事项
1. 用干净的镊子取出滤纸条,带手套卷成卷放入 Ep 管底部。
2. 样本灭活时保证同一批样本处理时间一致,建议沸水浴十分钟。
3. 批量样本测定之前先做 1-2 个样本的预实验,若吸光值超过 1.2,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。
4. 显色后取检测液时注意枪头不要碰到滤纸条,以免带入毛状物,影响测定结果。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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