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糖化酶(Glucoamylase)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1062 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/48S
  • 货号:LM-876748S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876748S
用途范围 糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖,与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物,在540nm处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比,可测定计算得糖化酶的活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/48S
是否进口

糖化酶(Glucoamylase)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

糖化酶,即葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3),又称 γ-淀粉酶,是一种外切型糖苷酶,它从淀粉的非还原性末端水解 α-1,4 糖苷键和 α-1,6 糖苷键,将淀粉完全水解为葡萄糖,因此广泛的应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸,甘油,淀粉糖等工业中,是我国重要的工业酶制剂之一。

测定原理:

糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖,与 3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物,在 540nm 处有 光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比,可测定计算得糖化酶的活力。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。(若出现沉淀,可以 90℃加热 5 分钟溶解后使用)试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
酶液提取:
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 4℃,10000g离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体:直接检测。
测定操作:

2022111710392189649
酶活性计算公式
标准曲线:y = 0.2164x - 0.0182,R2 = 0.9992
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白含量计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每毫克蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/mg prot)=(△A+0.0182)÷ 0.2164×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T=2.54×(△A+0.0182)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每克组织每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/g)=(△A+0.0182)÷ 0.2164×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2.54×(△A+0.0182)÷ W
3.按照液体体积计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每毫升培养液每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/mL)=(△A+0.0182)÷ 0.2164×V 反总÷V 样÷T=2.54×(△A+0.0182)
4.按照细胞数量计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每 104 个细胞每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/104cell)=(△A+0.0182)÷ 0.2164×V 反总÷(V 样×细胞数量(万个)÷V 样总)÷T= 2.54×(△A+0.0182)÷ 细胞数量(万个)
V 反总:反应总体积,0.11mL,V 样:反应体系中加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,20min

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1082x - 0.0182,R2 = 0.9992
1.按照蛋白含量计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每毫克蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/mg prot)=(△A+0.0182)÷ 0.1082×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 5.08×(△A+0.0182)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每克组织每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/g)=(△A+0.0182)÷ 0.1082×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=5.08×(△A+0.0182)÷ W
3.按照液体体积计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每毫升培养液每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/mL)=(△A+0.0182)÷ 0.1082×V 反总÷V 样÷T=5.08×(△A+0.0182)
4.按照细胞数量计算
酶活性定义:在 40℃,pH4.6 条件下,每 104 个细胞每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/104cell)=(△A+0.0182)÷ 0.1082×V 反总÷(V 样×细胞数量(万个)÷V 样总)÷T= 5.08×(△A+0.0182)÷ 细胞数量(万个)
V 反总:反应总体积,0.11mL,V 样:反应体系中加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,20min
注意事项
1.灭活样本的制备建议将样本放在沸水浴中煮沸 10min,以将酶 灭活。
2.测定之前进行预实验,若吸光值较高,请将样品用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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