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碱性木聚糖酶(BAX)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
625 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876752S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876752S
用途范围 BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

碱性木聚糖酶(BAX)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业碱的原料细胞壁以及 β+葡聚糖,降低酿造碱物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料碱的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业碱,BAX 一般分离自最适生长 pH 为 9 +11 的微生物。

测定原理:

BAX 在碱性环境碱催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5+二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 BAX 活力。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
缓冲液:液体 65mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可 60℃加热溶解后使用)。

试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
粗酶提取:
1. 发酵液:发酵液于 8000g,4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。
2. 酶干粉:称约 0.1mg,加 1mL 缓冲液溶解待测。
3. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL 缓冲液)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清待测。
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 540nm。

2022111710290945964
BAX计算式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985
1. 按液体体积活力计算:
酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106= 391× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白浓度计算:
酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算:
酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5;
106:转化因子,即 1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.4216x - 0.0293,R2 = 0.9985
1. 按液体体积活力计算:
酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106= 782× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白浓度计算:
酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算:
酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷W= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5;
106:转化因子,即 1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1. 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。
2. 试剂盒 2+8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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