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中性木聚糖酶测试盒/中性半纤维素酶测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
415 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876755S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876755S
用途范围 NEX在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算NEX活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

中性木聚糖酶测试盒/中性半纤维素酶测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,NEX 一般分离自最适生长 pH 为 6-8 的微生物。

测定原理:

NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 NEX 活力。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
缓冲液:液体 65mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可 60℃加热溶解后使用)。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
粗酶提取:
1. 发酵液:发酵液于 8000g,4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。
2. 酶干粉:称约 0.1mg,加 1mL 缓冲液溶解待测。
3. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL缓冲液)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清待测。
测定操作表:

2022111710093499653

2022111710094391556

NEX 计算公式:
标准曲线:y = 1.6904x + 0.0058,R2 = 0.9989
1. 按液体体积活力计算:
酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力(nmol/min/mL)= (ΔA-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×106= 657× (ΔA-0.0058)
2. 按蛋白浓度计算:
酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA -0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算:
酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA -0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×106÷W= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=1000μL÷200μL=5;
106:转化因子,即 1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1. 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍
数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。
2. 试剂盒 2-8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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