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几丁质酶测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1200 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/48S
  • 货号:LM-876758S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876758S
用途范围 几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/48S
是否进口

几丁质酶测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗 真 菌病害的研究热点。

测定原理:

几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在 585nm 处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯(土壤样品专用)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 105mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。(若出现结晶,可 80℃左右加热溶解后使用)
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。
2. 真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 20min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液:直接测定。
测定操作表:


2022111709580231566

2022111709581023544

计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.3088-0.003,R2=0.9995
计算公式:
1、 按照样本重量计算
酶活性定义:37℃条件下,每克组织每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=8.096×(ΔA +0.003)÷W
2、 按照蛋白质浓度计算
酶活定义:37℃条件下,每毫克蛋白每小时分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T = 8.096×(ΔA +0.003)÷Cpr
3、 按细胞数量计算
酶活定义:37℃条件下,每 104 个细胞每小时分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /104 cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=8.096×(ΔA +0.003)÷细胞数量
4、按液体体积计算
酶活定义:37℃条件下,每毫升培养液每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V 反总÷V 样=8.096×(ΔA +0.003)
V 反总:反应体系总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.4mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;
W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.1544x-0.003,R2=0.9995
计算公式:
4、 按照样本重量计算
酶活性定义:37℃条件下,每克组织每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.003)÷0.1544×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=16.192×(ΔA +0.003)÷W
5、 按照蛋白质浓度计算
酶活定义:37℃条件下,每毫克蛋白每小时分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T = 16.192×(ΔA +0.003)÷Cpr
6、 按细胞数量计算
酶活定义:37℃条件下,每 104个细胞每小时分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /104 cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=16.192×(ΔA +0.003)÷细胞数量
4、按液体体积计算
酶活定义:37℃条件下,每毫升培养液每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V 反总÷V 样=16.192×(ΔA +0.003)
V 反总:反应体系总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.4mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;
W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL
注意事项:
1、 反应结束后立即进行比色。
2、 试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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