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β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
510 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876761S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876761S
用途范围 β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。

测定原理:

β-GAL 分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有 吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算 β-GAL 活性。

自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、培养液等液体样本:直接检测。

测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂):

2022111709542756498

2022111709550238364

β-GAL 活性计算:
标准条件下测定的回归方程为 y =0.00543x -0.0027;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光值。
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)
(4)按液体体积计算:
单位的定义:每 mL 液体样本每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/min /mL)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷V 样÷T=61.39×(ΔA+0.0027)
V 反总:反应体系总体积,0.5mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,30min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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