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纤维素酶(CL)/羧甲基纤维素酶测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
487 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876771S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876771S
用途范围 采用3.5-二硝基水杨酸法测定CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

纤维素酶(CL)/羧甲基纤维素酶测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CL(EC 3.2.1.4)存在于细菌、真菌和动物体内,能够催化纤维素降解,是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。

测定原理:

采用蒽酮比色法测定CL催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、浓硫酸和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存; 临用前加入 5mL 蒸馏水和 45mL 浓硫酸充分溶解待用。

样品测定的准备:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、加样表(在 EP 管中依次加入下列试剂):

2022111709104598062

2022111709105668966

37℃振荡反应 1h 后,90℃水浴 15min(盖紧,防止水分散失),冷却后8000g 25℃离心 10min,取上清,得糖化液
2022111709111640268
混匀, 90℃水浴 10min(盖紧,防止水分散失),冷却,620nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算 ΔA=A测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
CL 活力计算:
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 5.018x - 0.0462;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、血清(浆)CL 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷V 样÷T =39.8×(ΔA+0.0462)
3、细胞、细菌和组织中 CL 活力的计算
(1)按照蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷(V 样×Cpr) ÷T=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.0796×(ΔA+0.0462)
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V 反总:反应体系总体积,1.2mL; V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,60 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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