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糖原含量测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
172 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876785S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876785S
用途范围 蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

糖原含量测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调 节 血 糖浓度,当血 糖 升 高时可在肝脏合成糖原,血 糖 降 低时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血 糖。因此,肝糖原对维持血 糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血 糖时,肌糖原不能直接分解成血 糖,必须先分解产生乳酸,随血 液 循 环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。

测定原理:

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;

糖原提取:
1﹑细胞或细菌:收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入 0.75mL 提取液超声波破碎细菌或细胞(功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);转移至 10mL 试管中,95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。
2﹑组织:称取 0.1~0.2g 样品,加入 0.75ml 提取液充分匀浆;转移至 10ml 试管中;95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;待组织全部溶解后,取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。

步骤和加样表:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95℃。
3、试剂二工作液的配制:在试剂二中倒入 10mL 蒸馏水,缓慢倒入 40mL 浓硫酸,充分溶解混匀后使用;用不完的试剂 4℃保存一周;
4、加样表(在 EP 管中反应):

2022111708452230135

2022111708453549799

混匀,95℃水浴 10min(盖紧,防止水分散失),冷却,于 620nm 波长处,以蒸馏水调零,分别读取空白管、标准管和测定管吸光度,分别记为 A1、A2 和 A3。
注意:1、空白管和标准管只要测一次。
2、 如果 A3-A1 大于 2,需要将样本用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。
糖原含量的计算:
1、按照样本质量计算
糖原(mg/g 鲜重)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
2、按照蛋白质含量计算
糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷Cpr1.11:是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数,即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于 100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色;C 标准管:标准管浓度,0.1mg/mL;V1:加入反应体系中糖原提取液体积,0.25mL;
V2:加入提取液体积,5mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意: 检测限为 10ng/g 鲜重或 0.1ng/ mg prot。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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