糖原含量测试盒/分光光度法说明书

测定意义：

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调 节 血 糖浓度，当血 糖 升 高时可在肝脏合成糖原，血 糖 降 低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血 糖。因此，肝糖原对维持血 糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血 糖时，肌糖原不能直接分解成血 糖，必须先分解产生乳酸,随血 液 循 环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。

测定原理：

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；

糖原提取：
1﹑细胞或细菌：收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入 0.75mL 提取液超声波破碎细菌或细胞（功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；转移至 10mL 试管中，95℃水浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到 5ml，混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。
2﹑组织：称取 0.1~0.2g 样品，加入 0.75ml 提取液充分匀浆；转移至 10ml 试管中；95℃水浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到 5ml，混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。

步骤和加样表：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95℃。
3、试剂二工作液的配制：在试剂二中倒入 10mL 蒸馏水，缓慢倒入 40mL 浓硫酸，充分溶解混匀后使用；用不完的试剂 4℃保存一周；
4、加样表（在 EP 管中反应）：

混匀，95℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却，于 620nm 波长处，以蒸馏水调零，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为 A1、A2 和 A3。
注意：1、空白管和标准管只要测一次。
2、 如果 A3-A1 大于 2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
糖原含量的计算：
1、按照样本质量计算
糖原（mg/g 鲜重）＝1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W
2、按照蛋白质含量计算
糖原(mg/mg prot)＝1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于 100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色；C 标准管：标准管浓度，0.1mg/mL；V1：加入反应体系中糖原提取液体积，0.25mL；
V2：加入提取液体积，5mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
注意： 检测限为 10ng/g 鲜重或 0.1ng/ mg prot。

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