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β葡萄糖苷酶(β-GC)/纤维二糖酶测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1027 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876766S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876766S
用途范围 β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

β葡萄糖苷酶(β-GC)/纤维二糖酶测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

β-GC(EC 3.2.1.21)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化 β-糖苷键水解,具有多方面生理作用:在纤维素的糖化作用中,β-GC 负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖;β-GC 水解萜烯类香气前驱体,使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味;β-GC 能够水解植物体内野黑樱苷,释放HCN,从而防止昆虫取食。


测定原理:

β-GC 分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有 吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算 β-GC 活性。
 
自备用品: 
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
 
试剂组成和配制: 
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 12mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
 
粗酶液提取: 
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、培养液、血清(浆)等液体样本:直接检测。
 
测定步骤: 
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。
2、 加样表

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充分混匀,放入 37℃准确水浴 30min 后,立即放入 95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变),8000g,4℃,离心 5min,取上清液(在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂)

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充分混匀,室温静置 2min 后, 400nm 处测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
β-GC 活力计算: 
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.00585x -0.0027;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光值。
(1)按液体体积计算:
单位的定义:每 mL 样本每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反总]÷V 样÷T=56.98×(ΔA+0.0027)
(2)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(3)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W
(4)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.114×(ΔA +0.0027)
V 反总:反应体系总体积,0.3mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,30min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0039x -0.0027;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光值。
(1)按液体体积计算:
单位的定义:每 mL 样本每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反总]÷V 样÷T=85.47×(ΔA+0.0027)
(2)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(3)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W
(4)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
β-GC 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.171×(ΔA +0.0027)
V 反总:反应体系总体积,0.3mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,30min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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