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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
452 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876769S
用途范围 β-1,3-GA水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA,因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。

测定原理:

β-1,3-GA 水解昆布多糖,内切 β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 3mL 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂二:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;

粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 550nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):

2022111709155514635

充分混匀,95℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,550nm 处记录各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式乘以相应稀释倍数),ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
β-1,3-GA 活性计算:
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0958x -0.0192;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、血清(浆)β-1,3-GA 活力的计算
β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)
3、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算
(1) 按蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h /g 鲜重)=[( ΔA +0.0192)÷0.09585×V1]÷(W×V1÷V2)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)
V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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