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还原糖含量测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
395 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876774S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876774S
用途范围 加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与540nm吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

还原糖含量测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

测定原理:

加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。

试剂的组成和配制:
试剂一:100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:8mL×1 瓶 ,4℃保存;

样品中还原糖的提取:
1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次),转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次,8000g,25℃离心 10min,取上清供测定用。
2、组织的处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次,8000g 吧,25℃离心 10min,取上清供测定用。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取 0.1mL 血清(浆)加入 1mL 试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min并且振荡 8~10 次,8000g,25℃离心 10min,取上清供测定用。

测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 调节水浴锅至 95℃。
3、 在 EP 管中加入下列试剂:

2022111709005649058

混匀,在 95℃水浴中加热 5min(盖紧,防止水分散失),取出后立即冷却至室温,混匀。取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,540nm 长下读取对照管和测定管吸光值。计算 ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
注意:如果 ΔA 大于 2,需要将样本用试剂一稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数(若显色后出现分层现象,
可改用蒸馏水稀释)。
还原糖含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 8.3796x- 0.3034;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
还原糖(μg/g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=119.34×(ΔA+0.3034)÷W
3、按样本蛋白浓度计算:
还原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA+0.3034)÷Cpr
4、按细菌或细胞密度计算:
还原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(500×V1÷V2)=0.239×(ΔA+0.3034)
5、按血清(浆)体积计算:
还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V3×V1÷V2)=1193.4×(ΔA+0.3034)1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入样本体积,0.175mL;V2:加入试剂一体积,1 mL;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 4.1898x - 0.3034, R2 = 0.9997;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
还原糖(μg/g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA+0.3034)÷W
3、按样本蛋白浓度计算:
还原糖(μg/mg prot)= [1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(V1×Cpr)=238.67×(ΔA+0.3034)÷Cpr
4、按细菌或细胞密度计算:
还原糖(μg/104 cell)= [1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(500×V1÷V2)=0.477×(ΔA+0.3034)
5、按血清(浆)体积计算:
还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(V3×V1÷V2)=2386.7×(ΔA+0.3034)1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入样本体积,0.175mL;V2:加入试剂一体积,1 mL;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
注意: 检测限为 1mg/g 鲜重或 10μg/mg prot

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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