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山梨醇脱氢酶(SH)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
418 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876775S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876775S
用途范围 SDH催化山梨醇脱氢生成果糖,同时还原NAD+生成NADH,测定340nm吸光度增加速率可以计算SDH活
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

山梨醇脱氢酶(SH)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

SH(EC 1.1.1.14)催化山梨醇脱氢生成果糖,是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。

测定原理:

SH 催化山梨醇脱氢生成果糖,同时还原 NAD+生成 NADH,测定 340nm 吸光度增加速率可以计算 SH 活性。
 
需自备的仪器和用品: 
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
 
试剂组成和配制: 
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入 15mL 蒸馏水,用不完的试剂仍 4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 15mL 蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存。
 
粗酶液提取: 
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
 
测定步骤: 
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定

2022111708580848049

将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中,加样本的同时开始计时,记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2分 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。
SH 活性计算:
1、血清(浆)SH 活力的计算
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/mL)= [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1688×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 SH 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1688×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=1688×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=3.376×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1.05×10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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