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葡萄糖含量测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1315 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876790S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876790S
用途范围 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

葡萄糖含量测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑、肌肉、脂肪组织等的 能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

测定原理:

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水

试剂的组成和配制:
试剂一:0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 10ml×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 10ml×1 瓶,4℃保存;(若出现结冰现象,可 37℃水浴溶解后使用)

葡萄糖提取:
1、组织的处理:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL蒸馏水),研磨成匀浆,95℃水浴 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清液备用。
2、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次),95℃水浴 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清液备用。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。
2、混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合,用多少配多少。
3、加样表(在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂):

2022111604341571637

混匀,置 37℃(哺乳动物)或 25'C(其它物种)保温 15min 后,于 505nm 波长处读取吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为 A1、A2 和 A3。空白管和标准管只要做一管。
葡萄糖含量计算:
1、按样本蛋白浓度计算
葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。
2、按样本鲜重计算
葡萄糖含量(μmol/g 鲜重)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
3、按细菌或细胞密度计算
葡萄糖含量(μmol/ 104 cell)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)
C 标准:标准管浓度,0.5μmol/mL;V1:加入样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
注意:
1、 检测限为 50nmol/g 鲜重或 0.5nmol/mg prot。
2、若样本中存在葡萄糖氧化酶抑制剂,则会造成测定结果偏低,建议改用 HPLC 法测定。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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