β-木糖苷酶测试盒/微量法说明书

测定意义：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

测定原理：

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定405nm 光吸收增加速率，可计算 β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 1mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 405nm。
2、 操作表

β-木糖苷酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值ΔA。
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫克蛋白 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每 104个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)
V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.12mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；1000:1μmol/L=1000nmol/L
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值ΔA
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫克蛋白 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每 104个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷V 样÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011)
V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.12mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；1000:1μmol/mL=1000nmol/mLΔA 控制在 0.01-1 范围内，若ΔA 大于 1，可适当减小样本量。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。