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β-木糖苷酶测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1660 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/48S
  • 货号:LM-877336S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-877336S
用途范围 β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰,测定405nm光吸收增加速率,可计算β-木糖苷酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/48S
是否进口

β-木糖苷酶测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。

测定原理:

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰,测定405nm 光吸收增加速率,可计算 β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 1mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 20min,取上清待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 液体:直接检测。
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 405nm。
2、 操作表

2022111604060572914

β-木糖苷酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值ΔA。
1、按蛋白浓度计算
酶活定义:45℃,pH7.4 时每毫克蛋白 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×1000= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4 时每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4 时每 104个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量(万个)
(4)按液体体积计算
酶活定义:45℃,pH7.4 时每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)
V 样总:加入提取液体积,1mL; V 反总:反应总体积,0.12mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;1000:1μmol/L=1000nmol/L
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=6.613x+0.0011,R2=0.9998;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值ΔA
1、按蛋白浓度计算
酶活定义:45℃,pH7.4 时每毫克蛋白 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×1000= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4 时每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4 时每 104个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量(万个)
(4)按液体体积计算
酶活定义:45℃,pH7.4 时每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷V 样÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011)
V 样总:加入提取液体积,1mL; V 反总:反应总体积,0.12mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;1000:1μmol/mL=1000nmol/mLΔA 控制在 0.01-1 范围内,若ΔA 大于 1,可适当减小样本量。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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