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果糖激酶(FRK)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1142 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-892775S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892775S
用途范围 FRK 催化果糖合成 6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸己糖异构酶的作用下异构为 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADH,NADH 在 340nm 有特征吸收峰。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

果糖激酶(FRK)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖是大多数高等植物从源到库运输的主要形式, 但进入库器官后被分解为果糖和葡萄糖,果糖在进入下一步代谢前必须由果糖激酶或己糖激酶进行磷酸化,以帮助库组织的建立和库强的提高。果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶,还可以作为植物的己糖感受器和信号分子,通过影响植物的生长周期来调控植物的代谢进程,在库组织中发挥重要的作用。因此,研究果糖激酶对研究植物中果糖代谢调节机制具有十分重要的意义。

测定原理:

FRK 催化果糖合成 6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸己糖异构酶的作用下异构为 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADH,NADH 在 340nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 25mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 12mL 试剂一充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 3mL 试剂一充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:液体 30μL×1 瓶,4℃保存;临用前加入 3mL 试剂一充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm。
2、 配好的试剂于 25℃预热 10min。
3、 样本测定
在 96 孔板中依次加入加入 50μL 样本、100μL 试剂二,25μL 试剂三,25μL 试剂四,混匀,立即记录340nm 处 30s 时的吸光值 A1 和 5min30s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:若 ΔA 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。或将反应时间缩短至2min,使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。
FRK 活性计算:
1、血清(浆)FRK 活性
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FRK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=257.2×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 FRK 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。FRK(nmol/min/mgprot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=257.2×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=257.2×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。FRK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.5144×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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