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细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
970 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876683S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876683S
用途范围 B-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与B-AI活性成正比。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,Ivr 分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。 AI 的最适 pH 为 3~5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI(B-AI)两种类型。B-AI 存在于细
胞间隙并结合在细胞壁上,主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解,以维持库源之间蔗糖的浓度。

测定原理:

B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。
 
自备用品: 
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
 
试剂组成和配制: 
提取液 1:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
提取液 2:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 10mL 试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;
 
粗酶液提取: 
按照组织质量(g):提取液 1 体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液 1),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min,弃上清,沉淀中加入 1mL 蒸馏水,充分震荡混匀,12000g 4℃离心 10min,弃上清,沉淀中加入 1mL 提取液 2 充分混匀,4℃浸提过夜,12000g 4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
 
测定步骤和加样表: 
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 510nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在 EP 管中依次加入下列试剂):

2022111603370662686

2022111603371927280

混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,取 200μL 至微量石英比色皿或 96孔板中, 510nm 处记录各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。
B-AI 活性计算: 
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性(μg /min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算:
单位的定义:37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性(μg /min /g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0008x -0.001;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性(μg /min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算:
单位的定义:37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性(μg /min /g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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