蔗糖合成酶(合成方向 SS-Ⅱ)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：

蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向 SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。

测定原理：

bSS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG 反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在 480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 4mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃保存
试剂四：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：液体 12mL×1 瓶，4℃避光保存；
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：

混匀，沸水浴 30min，冷却后， 480nm 下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅱ活性计算：
1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min /g 鲜重) = C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。