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蔗糖酶测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
452 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876695S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876695S
用途范围 本试剂盒采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

蔗糖酶测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的关键酶之一,能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。

测定原理:

本试剂盒采用 3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是 3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
 
所需的仪器和用品: 
可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
 
试剂的组成和配制: 
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支 ,4℃保存,用时加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂三:液体 3mL×1 瓶,常温保存;
 
样品测定的准备: 
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
 
测定步骤: 
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 520nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定,(在 EP 管中依次加入下列试剂):

2022111603122299097

混匀,取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中测定各管 520nm 吸光值,ΔA=A 测定-A 对照,每个测定管需设一个对照管。
蔗糖酶活力计算: 
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.1296x -0.12;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化水解 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化水解 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。
1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0648x -0.12;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化水解 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(V1×Cpr)÷T=1542×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化水解 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=1543×(ΔA +0.12) ÷W。
1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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