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淀粉脱分支酶(DBE)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1775 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876658S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876658S
用途范围 采用3,5-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖含量的变化来计算DBE活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

淀粉脱分支酶(DBE)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

DBE 能够专一性地裂解支链淀粉的α-1,6 糖苷键,产生线性的葡萄糖链,在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。

测定原理:

采用 3,5-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖含量的变化来计算 DBE活性。
需自备的的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;临用前每支加入 6mL 试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂三:液体 12mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。
2、加样表

2022111602551505176

混匀,95℃水浴 5min,取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,540nm 处读取各管吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设个一个对照管。

注意:可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。
DBE 活力单位的计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件测定回归方程为 y = 3.8458x - 0.165;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
(1)按照蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每 h 催化产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE 活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE 活力(mg /min /g 鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V 反总:反应体系总体积,0.2mL; V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:
反应时间,2 h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件测定回归方程为 y = 1.9229x - 0.165;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
(1)按照蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每 h 催化产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE 活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=0.52× (ΔA+0.165) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
DBE 活力(mg /min /g 鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=0.52× (ΔA+0.165) ÷W
V 反总:反应体系总体积,0.2mL; V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:
反应时间,2 h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
标准曲线线性范围为 0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA 线性范围为 0.01-1。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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