淀粉分支酶(SBE)测试盒/微量法说明书

测定意义：

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定 SBE 活性在淀粉生物合成、 农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。

测定原理：

直链淀粉和碘结合后在 660nm 有特征光吸收，SBE 使直链淀粉含量减少，从而降 低 了 淀 粉- 碘 复 合 物 在 660nm 吸 收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。
需自备的的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；临用前每支加入 1mL 蒸馏水，95℃沸水浴充分溶解后备用；用不完的试剂4℃保存；
试剂三：液体 13mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 1mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取 ：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2、加样表

注意：
1、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。
2、试剂二如有沉淀，务必沸水浴溶解后使用。
SBE 活力单位的计算：
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反应体系中每降低 1％碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/mg prot)=( A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷Cpr ×100
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 g 组织在反应体系中每降低 1％碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/g 鲜重)=(A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷(W÷V 样总)×100
V 样总：提取液总体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

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