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结合态淀粉合成酶(GBSS)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
6720 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876667S
用途范围 GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH的增加量,可以计算GBSS活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

结合态淀粉合成酶(GBSS)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。

测定原理:

GBSS 催化 ADPG 与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成 ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH,其中NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比,通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量,可以计算GBSS 活性。
需自备的的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×2 瓶,4℃保存;
试剂一:40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 14mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 8mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 10mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂五:液体×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
粗酶液制备 :
称取 0.1~0.2g 组织(建议称取约 0.1g 组织),加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10min,弃上清,在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂

2022111602320402244

GBSS 活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数=529×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS 活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T×稀释倍数=529×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.075 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数=1059×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS 活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T×稀释倍数=1059×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.075 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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