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可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
6720 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876670S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876670S
用途范围 SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

SSS(EC 2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。

测定原理:

SSS 催化 ADPG 与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成 ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH,NADPH 生成量与前一步反应中 ADP 生成量呈正比,340nm 下测定 NADPH 增加量即可计算 SSS 活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 14mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 8mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 10mL 试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂五:液体×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 500μL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
粗酶液制备:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂


2022111602253557749

2022111602255617367

SSS 活性计算:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

SSS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样) ÷T×稀释倍数=529×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
SSS 活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W)÷T×稀释倍数=529×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.075 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
SSS(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样) ÷T×稀释倍数=1059×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
SSS 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W)÷T×稀释倍数 =1059×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.075 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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