磷脂酶D(PLD)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：
磷脂酶 D（EC3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

测定原理：

磷脂酶 D 催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱，胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将 4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在500nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅，无水乙醇。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 55mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 3mL 无水乙醇充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体 35mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：液体 1mL×1 支，4℃避光保存。
酶液提取：
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
3. 血清：直接测定。
测定操作：

酶活计算公式：
1．按照蛋白浓度计算

注意事项：
1. 显色完成后，若有沉淀，于 8000g，25℃离心 5min 后取上清测定。
2. 吸光值不宜超过 1，否则用试剂一将酶液进行稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。