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β-淀粉酶(β-AL)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
855 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876675S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876675S
用途范围 还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

β-淀粉酶(β-AL)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

淀粉酶负责水解淀粉,主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的 α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

测定原理:

还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
试剂一:30mL×1 瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需 90℃加热溶解后再用;
试剂二:15mL×1 瓶,4℃保存,若出现沉淀析出,需 70℃加热溶解后再用。

粗酶液提取:
组织:称取 0.1~0.2g 样本(建议称取约 0.1g 样本),加入 1mL 蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取 15min,每 5min 振荡 1 次,使其充分提取;3000g,25℃离心 10min,取上清液加蒸馏水定容至 10 mL,摇匀,即淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液 1mL,加入 4mL 蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。血清(浆)等液体样本:(1)直接检测 α-淀粉酶。(2)吸取淀粉酶原液 1mL,加入 4mL 蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。

测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。
2、试剂一和试剂二 40℃预热 10min.
3、测定操作表:

2022111602141018778

2022111602142840557

酶活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为 y=3.7215x -0.1778; x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、α-淀粉酶活性
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.075×(A2-A1+0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=0.1075×(A2-A1+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(浆)等液体样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T=0.1075×(A2-A1+0.1778)
3、总淀粉酶活性计算
(1)按照样品质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min//g 鲜重)=5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=5.375×(A4-A3+0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=0.5375×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(浆)等液体样本中总淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mL) =5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T=0.5375×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性计算
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[5.375×(A4-A3+0.1778)-1.075×(A2-A1+0.1778)]÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3+0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
(3)血清(浆)等液体样本中 β-淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.5375×(A4-A3+0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)
5:总淀粉酶稀释倍数;V 反总:反应体系总体积,0.15mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.075 mL;
V 样总:提取液总体积,10 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为 y=2.481x -0.1778; x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、α-淀粉酶活性
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.612×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T =0.1612×(ΔA+0.1778)÷Cpr
(3)血清(浆)等液体样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷V 样÷T =0.1612×(ΔA+0.1778)
3、总淀粉酶活性计算
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=8.06×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=0.806×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(浆)等液体样本中总淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mL)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V 反总]÷V 样÷T=0.806×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性计算
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[8.06×(A4-A3+0.1778)-1.612×(A2-A1+0.1778)]÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.806×(A4-A3+0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr

(3)血清(浆)等液体样本中 β-淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.806×(A4-A3+0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)5:总淀粉酶稀释倍数;V 反总:反应体系总体积,0.15mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.075 mL;
V 样总:提取液总体积,10 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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