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α-淀粉酶(α-AL)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
372 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-876677S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876677S
用途范围 淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在540 nm有吸收峰;通过测定540 nm吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。α-AL耐热,但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min,就只有α-AL能够催化淀粉水解。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

α-淀粉酶(α-AL)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

淀粉水解酶,包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中 α-1,4-糖苷键水解,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。

测定原理:

淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在 540 nm 有吸收峰;通过测定 540 nm 吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。α-AL 耐热,但是 β-淀粉酶可在 70℃钝化 15min。因此粗酶液经过 70℃钝化 15min,就只有 α-AL 能够催化淀粉水解。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
试剂一:液体 15mL×1 瓶,室温保存。若有黄色晶体析出,可 90℃加热溶解后再用。
试剂二:液体 7.5mL×1 瓶,4℃保存。若有沉淀析出,可 70℃加热溶解后使用。
粗酶液提取:
组织:称取 0.1~0.2g 样本(建议称取约 0.1g 样本),加 1 mL 蒸馏水匀浆;将匀浆倒入离心管中,在室温下放置提取 15min,每隔 5min 振荡 1 次,使其充分提取;3000g,25℃离心 10min,吸取上清液并且加蒸馏水定容至 10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。
血清(浆):直接检测。

操作步骤和加样表(在 EP 管中依次加入下列试剂):
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。
2、 试剂一和试剂二 40℃预热 10min。
3、测定步骤:

2022111602082759459

混匀,95 度水浴 5min,冷却,取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,540nm 处读取吸光值,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
α-淀粉酶活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为 y=3.7215x -0.1778; x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、α-淀粉酶活性
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
α-淀 粉 酶 活 性 (mg/min/g 鲜 重 )=[(ΔA + 0.1778)÷3.7215×V 反 总 ]÷(W×V 样 ÷V 样 总 )÷T=1.075×(ΔA +0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA+0.1778)÷Cpr
(3)血清(浆)样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA+0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T=0.1075×(ΔA+0.1778)
反总:反应体系总体积,0.15mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.075 mL;V 样总:提取液总体积,10mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为 y=2.481x -0.1778; x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、α-淀粉酶活性
(1)按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.612×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T =0.1612×(ΔA+0.1778)÷Cpr
(3)血清(浆)样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1mg 还原糖定义为 1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA+0.1778)÷2.481×V 反总]÷V 样÷T=0.1612×(ΔA+0.1778)
V 反总:反应体系总体积,0.15mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.075 mL;V 样总:提取液总体积,10 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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