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淀粉磷酸化酶(SP)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
1373 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-892770S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892770S
用途范围 淀粉磷酸化酶催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸,并在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP+产生 NADPH,使 340nm 下吸光值增加。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

淀粉磷酸化酶(SP)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
淀粉磷酸化酶(Starch Phosphorylase,SP)是淀粉代谢过程 的可逆反应酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。

在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于质体中,负责延长淀粉的 α-1,4-葡萄糖链的非还原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于细胞质基质中,催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸,负责葡萄糖链的磷酸解,是淀粉代谢过程中的关键酶。

测定原理:

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸,并在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原 NADP+产生 NADPH,使 340nm下吸光值增加。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 3mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存;

试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 3mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存。
样本的前处理:
1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零;
2、 工作液的配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照每个样本 850μL:50μL:50μL 的比例混合,临用前配制,半小时内使用。
3、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 工作液,立即混匀,记录 340nm 处 1min 时的吸光值 A1 和 6min 时的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
SP 活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。SP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=943×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。SP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=943×ΔA÷W
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每万个细胞每分钟产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
SP(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(细胞数量 ×V 样÷V 样总)÷T =1.886×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;细胞数量,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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