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肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
1545 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876616S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876616S
用途范围 基于肉碱和脂酰辅酶A在丙二酰辅酶A存在与否的条件下,通过肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用,产生脂酰肉碱,并释放出巯基辅酶A(COA-SH),与Ellman试剂DN-TB反应后,产生黄色的TNB。通过其吸收峰值得变化(412nm),来定量分析CPT-1的活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
肉毒碱棕榈酰转移酶是存在于线粒体内膜的一类酰基转移酶。可逆地催化从酰基辅酶 A 将酰基转移至 L-肉毒碱的反应,在转运脂肪酸通过线粒体内膜的过程中起重要作用。

测定原理:

基于肉碱和脂酰辅酶 A 在丙二酰辅酶 A 存在与否的条件下,通过肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用,产生脂酰肉碱,并释放出巯基辅酶 A(COA-SH),与 Ellman 试剂 DN-TB 反应后,产生黄色的 TNB。通过其吸收峰值得变化(412nm),来定量分析 CPT-1 的活性。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:液体 10mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 1mL×1 支,-20℃保存;
试剂四:液体 55mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;

样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆液于 600g,4℃离心 5min。
③ 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
④ 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 CPT-1(此步可选做)。
⑤ 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3秒,间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体 CPT-1 测定。

测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)在试剂五中加入 2mL 无水乙醇,混匀,再加入 44mL 试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(2)在试剂六中加入 2mL 蒸馏水,混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(3)在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 样本、880μL 试剂五和 40μL 试剂六,混匀,记录 412nm 处 20 秒
时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。
CPT-1 活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。
CPT-1(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=880×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。
CPT-1(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=177.8×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。
CPT-1(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.3556×ΔA
V 反总:反应体系总体积,9.6×10-4 L;ε:TNB 摩尔消光系数,1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;
V 样:加入样本体积,0.04 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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