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ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
1545 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876618S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876618S
用途范围 ACL在ATP和辅酶A存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算ACL活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的关键酶,其催化产生的乙酰辅酶 A 可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。

测定原理:

ACL 在 ATP 和辅酶 A 存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶 A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH 生成苹果酸和 NAD+,在 340nm 测定 NADH 减少速率,计算 ACL活性。
 
需自备的仪器和用品: 
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
 
试剂组成和配制: 
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 5μL×1 支,4℃保存;
 
样本的前处理: 
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
 
测定步骤: 
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液的配置,将试剂二和试剂三转移至试剂一中,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;(注意:可取少量试剂一至试剂二和试剂三中,充分混匀溶解后转移至试剂一瓶中,重复 2-3 遍);用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2)在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 工作液,混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1和 2min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。

ACL 活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)ACL 活力计算
单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1608×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.216×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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