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乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
798 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876630S
  • 发布日期: 2022-11-16
  • 更新日期: 2022-11-16
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876630S
用途范围 ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷,通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
ACC在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A,是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

测定原理:

ACC 能够催化乙酰辅酶 A、NaHCO3和 ATP 生成丙二酰辅酶 A、ATP 和无机磷,通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定 ACC 活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:20mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;
试剂四:粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水,溶解后 4℃可保存一周。
试剂五:粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水,溶解后 4℃可保存一周。
试剂六:液体 25mL×1 瓶,室温保存。
试剂七:10μmol/mL 标准磷贮备液 10mL×1 瓶,4℃保存。
样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 660nm,蒸馏水调零。
2、 酶促反应试剂的配制和预热:在试剂二瓶中加入 6.5mL 试剂一,充分溶解混匀;在试剂三瓶中加入 5mL蒸馏水,充分溶解混匀;将试剂一、二、三在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟。
3、定磷试剂的配制:按 H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷试剂应为浅黄色,若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。

注意:配试剂 用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
4、0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将试剂七 20 倍稀释,即取 0.5mL 试剂七加 9.5 蒸馏水,充分混匀。
5、酶促反应
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37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确反应 30min 后,90℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失),冷却后,10000g 25℃离心 5min,取上清
6、定磷

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混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 30min,冷却至室温,在 660nm 处,蒸馏水调零,记录各管吸光值 A。标准管、空白管只要做一次即可,每个测定管需要设一个对照管。
注意:若测定管吸光值大于 2,将样品用提取液稀释适当倍数后再进行测定,使吸光值小于 2,可提高检测灵敏度,计算公式中乘以相应稀释倍数。
ACC 活性计算:
1、按组织蛋白浓度计算:
定义:每小时每毫克组织蛋白产生 1μmol 无机磷的量为一个 ACC 活力单位。
ACC (μmol/h/mg prot)=(C 标准管×V 总)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(V 样×Cpr)÷T=10×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
2、按样本鲜重计算:
定义:每小时每 g 组织产生 1μmol 无机磷的量为一个 ACC 活力单位。
ACC (μmol/h/g 鲜重)=(C 标准管×V 总)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(W× V 样÷V 样总)÷T=10×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
3、 按细菌或细胞密度计算:
定义:每小时每 500 万细菌或细胞产生 1μmol 无机磷的量为一个 ACC 活力单位。
ACC (μmol/h/104 cell)=(C 标准管×V 总)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(500× V 样÷V 样总)÷T=0.02×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准管:标准管浓度,0.5μmol/mL;V 总:酶促反应总体积,0.5mL;V 样:加入样本体积,0.05mL ;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,0.5 小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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