总胆固醇(TC)含量测试盒/分光光度法说明书

测定意义：
TC 包括游离胆固醇和胆固醇酯。TC 是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。

测定原理：

利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为 FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H2O2； 利用过氧化物酶催化 H2O2氧化 4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与 TC 含量成正比。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：异丙醇 50mL（自备）。
试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 100μL×1 瓶，4℃保存
TC 标准品：液体 1mL×1 支，0.5μmol/mL，4℃保存。
TC 的提取：
1、组织中 TC 的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清，即 TC 待测液。
2、细胞、细菌中 TC 的提取：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL 试剂一，超声波破碎 1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），即 TC 待测液。
3、血清（浆）等样品：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 500 nm，蒸馏水调零。
2. TC 工作液的配制：临用前，吸取约 0.8mL 试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，TC 工作液置于 37℃水浴 10min。用不完的工作液 4℃保存一周。
3. 标准管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL FC 标准液和 900μL TC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于500nm 测定 A 标准管。
4. 测定管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL FC 待测液和 900μL TC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于500nm 测定 A 测定管。
5. 空白管：依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL 试剂一和 900μL TC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于500nm 测定 A 测定管。

注意：标准管和空白管只需测定一次。
计算公式：
1. 血清（浆）中 TC 含量：
TC（μ mol /dL）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×100= 50×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）
C 标准液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 组织中 TC 含量：
(1)按样本蛋白浓度计算
TC（μ mol/mg prot）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr = 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr
(2)按样本质量计算
TC（μ mol / g 鲜重）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W= 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W
C 标准液：0.5μmol/mL；样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL
3. 细胞、细菌中 TC 含量：
TC（μ mol /104 cell）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷细菌或细胞（104 cell/L）= 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷细菌或细胞（104 cell /L）
C 标准液：0.5μmol/mL。
注意事项：
检出限为 1nmol/mL。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。