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酰基转移酶(AAT)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
6720 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876644S
  • 发布日期: 2022-11-15
  • 更新日期: 2022-11-15
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876644S
用途范围 AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,同时还原DTNB生成TNB;TNB在412nm有吸收峰,测定412nm吸光度增加速率,来计算AAT活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

酰基转移酶(AAT)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
AAT 是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。


测定原理:

AAT 催化乙酰 CoA 转移乙酰基到丁醇,释放的 CoA 还原 DTNB 生成 TNB;TNB 在 412nm 有吸收峰,测定 412 nm 吸光度增加速率可计算 AAT 活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存。
试剂三:粉剂×1 支,4℃避光保存。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 液体:直接检测。
AAT 测定操作:
1、分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
2、工作液的配制:临用前在试剂二瓶中加入 18mL 试剂一,充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、试剂三的配制:临用前加无水乙醇 1mL 充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存。
4、 空白管:在 Ep 管或 96 孔板中加入 10μL 提取液和 180μL 工作液,充分混匀,35℃反应 15min,加入 10μL试剂三,充分混匀,25℃静置 10min,测定 412nm 处吸光值,记为 A 空白管。
5、 测定管:在 Ep 管或 96 孔板中加入 10μL 样本和 180μL 工作液,充分混匀,35℃反应 15min,加入 10μL试剂三,充分混匀,25℃静置 10min,测定 412nm 处吸光值,记为 A 测定管。△A=A 测定管- A 空白管,空白管只要做一管。
AAT 活性计算:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 98.04×△A÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ÷T = 98.04×△A÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:每 104个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T= 98.04×△A÷ 细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:每毫升样品每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/mL) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷V 样÷T = 98.04×△A :TNB 消光系数,13600L/mol/cm;d:比色皿光径:1cm;V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,15 min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =196.08×△A÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ÷T = 196.08×△A÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:每 104个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T=196.08×△A÷ 细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:每毫升样品每分钟催化产生 1nmol TNB 定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min/mL) = △A ÷(? ×d)×V 反总÷V 样÷T = 196.08×△A :TNB 消光系数,13600L/mol/cm;d:96 孔板光径:0.5cm;V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,15min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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