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脂氧合酶(LOX)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
368 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/48S
  • 货号:LM-876646S
  • 发布日期: 2022-11-15
  • 更新日期: 2022-11-15
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876646S
用途范围 LOX催化亚油酸氧化,氧化产物在234nm处有特征吸收峰;测定234nm吸光度增加速率,来计算LOX活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/48S
是否进口

脂氧合酶(LOX)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
LOX 广泛存在于动植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在生物体的生 长 发 育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。


测定原理:

LOX 催化亚油酸氧化,氧化产物在 280nm 处有特征吸收峰;测定 280nm 吸光度增加速率,来计算 LOX 活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 支,4℃保存。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 280 nm,蒸馏水调零。
2. 在试剂三中加入 10mL 试剂二(振荡混匀 1min),在 30℃水浴中预热 10 min 以上。用不完的试剂 4℃保存。
3. 对照管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 样本和 180μL 试剂二,30℃反应 30min 后,记录 A对照。
4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 样本和 180μL 试剂三,30℃反应 30min 后,记录 A测定。
5. ΔA=A 测定-A 对照
LOX 活性计算:
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。
LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×100= 33.33×ΔA÷Cpr

(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。
LOX (U/g 鲜重) =ΔA×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×100= 33.33×ΔA÷W
Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,需另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;V 反总:反应体系总体积,200μL=0.2mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL;W :样品质量,g;V
样总:上清液总体积,1mL;T:反应时间,30min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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