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脂肪酶(LPS)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
510 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876650S
  • 发布日期: 2022-11-15
  • 更新日期: 2022-11-15
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876650S
用途范围 LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

脂肪酶(LPS)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
LPS 又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰 腺 炎和胰 腺 癌。


测定原理:

LPS 催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算 LPS 活性。
自备仪器和用品:
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、甲苯 80mL、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 65mL×2 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。
试剂三:甲苯 80mL×1 瓶,4℃保存(自备)。
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
标准品:液体 10 μL×1 瓶,10 μmol/mL 的标准溶液,4℃保存。临用前加入 3.168 mL 甲苯,充分溶解。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后12000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体: 直接检测。
LPS 测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 710 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min。
3. 在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂

2022111510171228554

2022111510172287459

37℃振荡反应 5 min 后,静置 5min,取 200μL 上层液加入微量石英比色皿/96 孔板,于 710nm 处测定吸光值。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
LPS 活性计算公式:
1. 组织、细菌或细胞 LPS 活性
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准- A 空白管)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/g 鲜重) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]×V 反总÷(W×V 样÷V样总)÷T=16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]÷W
(3)按照细菌或者细胞数量计算
活性单位定义:37℃中每 104个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]÷细胞数量
2. 血清等液体 LPS 活性
活性单位定义:37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/mL) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]×V 反总÷V 样÷T=16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]
C 标准品:10 μmol/mL;V 反总:反应总体积,0.8mL;V 样:反应中加入样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;W:样本质量,g;T:催化反应时间,10 min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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