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脂肪酸合成酶(FAS)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
1200 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:10管/9样
  • 货号:LM-876653S
  • 发布日期: 2022-11-15
  • 更新日期: 2022-11-15
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876653S
用途范围 以NADPH为还原力,FAS催化乙酰CoA和丙二酰CoA生成长链脂肪酸;通过测定NADPH的减少量,即可推算出FAS活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 10管/9样
是否进口

脂肪酸合成酶(FAS)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
FAS 是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。


测定原理:

FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+;NADPH 在 340nm 有吸收峰,而NADP+没有;通过测定 340nm 光吸收下降速率,计算 FAS 活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 10mL×1 瓶,-20℃保存。用前取出置于 4℃充分解冻后混匀。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 275 μL 试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 275 μL 试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 525 μL 试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心 40min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后12000g,4℃,离心 40min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
FAS 测定操作:
1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min。
3. 测定管:在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、20μL 试剂二、20μL 试剂三、820μL 试剂四和 40μL试剂五,迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值,记录第 30s 和 90s 时吸光值,分别记录为 A1 和 A2。△A 测=A1-A2。

FAS 活性计算公式:
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(Cpr×V 样)÷T=1608×△A÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1608×△A ÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:37℃中每 104个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1608×△A ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷V 样÷T=1608×△A
ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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