游离脂肪酸含量(FFA)测试盒测植物组织/微量法说明书

测定意义：
FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。

测定原理：

在弱酸性条件下，FFA 与铜盐反应生成铜皂，在 715nm 处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。
自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
样品中 FFA 提取：
组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）加入试剂一，震荡提取 3h，8000g，4℃离心 10min，取上清液待测。
测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 715 nm。
2. 对照管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 试剂二，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板，调零。
3. 测定管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 试剂三，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板，测定吸光值，记为 A。
FFA 含量计算：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994
（1）按样本蛋白浓度计算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按样本质量计算
FFA（nmol/g 鲜重）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=133×(A-0.0055)÷W

V1：加入样本体积，0.4mL；V2：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0038 x+ 0.0055，R2=0.994
（1）按样本蛋白浓度计算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1×Cpr)=266×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按样本质量计算
FFA（nmol/g 鲜重）= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1÷V2×W)=266×(A-0.0055)÷W
V1：加入样本体积，0.4mL；V2：提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
注意事项：
1. 蛋白含量不可直接用提取的上清液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。
2. 检出限为 2 nmol/mL。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。