联系方式
地址:上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
联系人:周经理
电话:021-67680335
手机:13052188602
邮箱:shlmai@163.com
网址:www.shlmai.com
游离脂肪酸含量(FFA)测试盒/分光光度法-测血清、动物组织、微生物、细胞
物品单位 价格 品牌
395 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-892767S
  • 发布日期: 2022-11-15
  • 更新日期: 2022-11-15
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892767S
用途范围 用有机溶剂萃取FFA。含有FFA的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA一Cu。Cu离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与Cu离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律,因此可利用此反应进行比色。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

游离脂肪酸含量(FFA)测试盒/分光光度法-测血清、动物组织、微生物、细胞说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
游离脂肪酸,也称为非酯化脂肪酸,在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内 分 泌功能有关,游离脂肪酸的浓度会因为糖 尿 病、重 症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。


测定原理:

用有机溶剂萃取 FFA。含有 FFA 的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA 一 Cu。Cu 离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与 Cu 离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律,因此可利用此反应进行比色。

自备的仪器和用品:
可见分光光度计、离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂的组成和配制:
萃取液:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 8 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 8 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,室温保存;
试剂四:液体 18 mL×1 瓶,4℃保存;

样本前处理:
1.动物组织:按照动物组织质量(g):萃取液 mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL萃取液),进行冰浴匀浆。震荡提取 15min,5000 rpm 4℃离心 5min,取有机相待测。
2.血清:吸取 50 μL 血清样本,加入 1 mL 萃取液,震荡提取 15 min 后,4℃,5000 rpm 离心 5 min,取有机相待测。
3.微生物、细胞:按照细胞数量(104 个):萃取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1 mL 萃取液)加入萃取液,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 2 秒,间隔 3 秒,总时间3min);震荡提取 15 min,然后 5000 rpm 4℃离心 5min,取有机相待测。
注意:有机相待测液可能存在于上层,也可能存在于下层,注意观察,体积较多的那一层即为有机相待测液。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 550 nm。
2、 工作液的配制:临用前根据用量按照试剂一(V):试剂二(V):试剂三(m)=1(mL)1(mL):0.66(g)的比例充分混匀。(注意:现用现配,用多少配多少,在空瓶中配制,试剂盒中带有 4 个空瓶,先将试剂一与试剂二混合, 再加入试剂三粉剂)
3、测定管:吸取750μL样本,加入250μL工作液,盖紧后震荡20 min,4℃,5000 rpm离心5 min,分层后取600μL上层有机相,加入300μL试剂四,摇匀,10 min后于玻璃比色皿中测定550 nm的吸光值,记为A测定。
4、空白管:吸取750μL萃取液,加入250μL工作液,盖紧后震荡20 min,4℃,5000 rpm离心5 min,分层后取600μL上层有机相,加入300μL试剂四,摇匀,10 min后于玻璃比色皿中测定550 nm的吸光值,记为A测定。空白管只需测一次。
空白管只需测一次。△A=A测定-A空白
注意:1、有机溶剂易挥发,加入比色皿后应尽快检测。
2、测定管中加入的样本即样本前处理中的有机相待测液。
FFA 含量计算:
标准曲线:y = 0.0322x - 0.0141 R2 = 0.9985 x:棕榈酸标准品浓度(nmol/mL) y:吸光值差值△A
1、血清 FFA 含量计算:
FFA 含量(μmol/mL)=(△A+0.0141)÷0.0322×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000 =0.621×(△A+0.0141)
2、动物组织、微生物、细胞中 FFA 含量计算:
(1)按样本质量计算
FFA 含量(μmol/g 鲜重)=(△A+0.0141)÷0.0322×V1÷(W× V1÷V2)÷1000=0.031×(△A+0.0141)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
FFA 含量(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0322×V1÷(V1×Cpr)÷1000=0.031×(△A+0.0141)÷Cpr
V1:加入样本体积,0.75 mL;V2:萃取液体积,1mL;V3:加入血清(浆)体积,0.05 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:动物组织样品质量,g; 1000:1 μmol=1000 nmol 。
注意事项:
1. 蛋白含量不可直接用萃取液提取的有机相待测液直接测定,可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。
2. 检出限为 10 nmol/mL。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

联系方式
手机:13052188602
电话:021-67680335
Q Q:
手机访问官网
Copyright © 2022 上海联迈生物工程有限公司 XML 技术支持: 食品商务网   盖德化工网