糜蛋白酶(Chymotrypsin)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：
糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临 床 上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创 伤或手术 后 伤 口 愈 合，如白 内 障摘除。

测定原理：

糜蛋白酶催化 ATEE 水解，产物在 237 nm 有特征光吸收；通过测定 237 nm 光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 50 mL 蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。
测定步骤：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 237 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 37℃水浴中保温 30min。
3. 空白管：取 1mL 石英比色皿，加入 100μL 试剂一，1000μL 试剂二，混匀于 237nm 测定 4min 内吸光值变化，记为△A 空白管。（从吸光值稳定增加开始计时）
4. 测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 100μL 粗酶液，1000μL 试剂二，混匀于 237nm 测定 4min 内吸光值变化，记为△A 测定管。（从吸光值稳定增加开始计时）
注意：空白管只需要测定一次。
糜蛋白酶活性计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷Cpr
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），100μL=0.1mL；V 反总：反应总体积，1100μL=1.1mL；T：反应时间（min），4min。

（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/g 鲜重）=(△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷W
W：样品质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），100μL=0.1 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；V 反总：反应总体积，1100μL=1.1mL；T：反应时间（min），4min。
注意事项：
临用前配制的试剂配置好后 3 天内使用完毕。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。