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糜蛋白酶(Chymotrypsin)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1085 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876605S
  • 发布日期: 2022-11-15
  • 更新日期: 2022-11-15
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876605S
用途范围 糜蛋白酶催化ATEE水解,产物在237 nm有特征光吸收;通过测定237 nm 光吸收增加速率,来计算糜蛋白酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

糜蛋白酶(Chymotrypsin)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
糜蛋白酶,又称胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似,但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临 床 上糜蛋白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创 伤或手术 后 伤 口 愈 合,如白 内 障摘除。


测定原理:

糜蛋白酶催化 ATEE 水解,产物在 237 nm 有特征光吸收;通过测定 237 nm 光吸收增加速率,来计算糜蛋白酶活性。
自备仪器和用品:
台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 20 mL 蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取:
组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即粗酶液。
测定步骤:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 237 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 37℃水浴中保温 30min。
3. 空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,加入 20μL 试剂一,200μL 试剂二,混匀于 237nm 测定 4min 内吸光值变化,记为△A 空白管。(从吸光值稳定增加开始计时)
4. 测定管:取微量石英比色皿/96 孔板,加入 20μL 粗酶液,200μL 试剂二,混匀于 237nm 测定 4min 内吸光值变化,记为△A 测定管。(从吸光值稳定增加开始计时)
注意:空白管只需要测定一次。
糜蛋白酶活性计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

(2)按样本质量计算
活性单位定义:25℃每克样品每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/g 鲜重)=(△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
W:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2 mL;V2:粗酶液总体积(mL),1 mL;V 反总:反应总体积,220μL=0.22mL; T:反应时间(min),4min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:25℃每克样品每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/g 鲜重)=(△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

W:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2 mL;V2:粗酶液总体积(mL),1 mL;V 反总:反应总体积,220μL=0.22mL; T:反应时间(min),4min。
注意事项:
临用前配制的试剂配置好后 3 天内使用完毕。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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