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胃蛋白酶(Pepsin)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
337 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/48S
  • 货号:LM-876607S
  • 发布日期: 2022-11-15
  • 更新日期: 2022-11-15
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876607S
用途范围 胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/48S
是否进口

胃蛋白酶(Pepsin)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢 性 胃 炎、慢性胃 扩 张、慢性十二指肠 炎等症 状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。


测定原理:

胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 10mL 试剂二充分溶解。
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 10mL 蒸馏水充分溶解。
试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 15mL 蒸馏水充分溶解。
试剂六:液体 3.3mL×1 瓶,4℃保存。
标准品:液体 1.27mL×1 支,0.5μmol/mL 酪氨酸标准溶液浓度 4℃保存。
粗酶液提取:
组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即粗酶液。
测定步骤:
1.分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 580 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三和试剂四置于 37℃水浴预热 30min。
3. 标准管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 20μL 标准品,40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 标准管。
4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 20μL 蒸馏水,40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 标准空白管。
5. 对照管:取 EP 管,加入 100 μL 蒸馏水,置于 37℃水浴保温 10min;加入 100μL 试剂四,盖紧后摇匀 1min;加入 20μL 粗酶液,混匀后 8000g 4℃离心 10 分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL,再加入 40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 空白管。
6. 测定管:取 EP 管,加入 20μL 粗酶液,100μL 试剂三,置于 37℃水浴保温 10min;加入 100μL 试剂四,盖紧后摇匀 1min;8000g 4℃离心 10 分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL,再加入40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 测定管。
注意:空白管和标准管只需要测定一次。
计算公式:
a.使用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T=27500×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鲜重)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T=27500×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷WC 标准品:标准品浓度,0.5 μmol/mL 酪氨酸;稀释倍数:(20+100+100)÷20=11;Cpr粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2mL;W:组织质量(g);V2:粗酶液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
((1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T=27500×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鲜重)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T=27500×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准品:标准品浓度,0.5 μmol/mL 酪氨酸;稀释倍数:(20+100+100)÷20=11;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2mL;W:组织质量(g);V2:粗酶液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min。
注意事项
试剂三、试剂四、试剂五临用前配制,配制好用不完的试剂 4℃可保存一周。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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