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羟甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGCS)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
7295 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876542S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876542S
用途范围 HMGCS催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,同时产生CoASH,使DTNB转化为黄色的TNB,在412nm下有特征吸光值。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

羟甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGCS)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
羟甲基戊二酰辅酶 A 合成酶是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶,催化乙酰 CoA 与乙酰乙酰 CoA 生成羟甲基戊二酰 CoA。


测定原理:

HMGCS 催化乙酰 CoA 与乙酰乙酰 CoA 生成羟甲基戊二酰 CoA,同时产生 CoASH,使 DTNB 转化为黄色的TNB,在 412nm 下有特征吸光值。

所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:6mL×1 瓶,4℃避光保存。

样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 25μL 试剂一、25μL 试剂二和 50μL 试剂三,混匀,加入 100μL 样本上清,迅速混匀后记录 412nm 下初始吸光值 A1 和 4min 后的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。
HMGCS 活性计算:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)活性
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样 ÷T=36.76×ΔA
2、组织、细菌或细胞 HMGCS 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=36.76×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /104 cel)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.074×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:TNB 摩尔消光系数,1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,4 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。
用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)活性
单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样 ÷T=73.53×ΔA
2、组织、细菌或细胞 HMGCS 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=73.53×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=73.53×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS(nmol/min /104 cel)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.147×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:TNB 摩尔消光系数,1.36×104 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,4 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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