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柠檬酸(CA)含量测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
402 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876575S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876575S
用途范围 酸性条件下,柠檬酸可将Cr6+还原成Cr3+,在545nm处有特征吸收峰;通过测定545nm吸光值的增加,即可计算出样品中柠檬酸含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

柠檬酸(CA)含量测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
CA 是生物体内常见的有机酸,是重要的食品风味物质。此外,CA 是三羧酸循环 步反应的产物。


测定原理:

酸性条件下,柠檬酸还原 Cr6+生成 Cr3+,在 545nm 处有特征吸收峰;通过测定 545nm 吸光值的增加,即可计算出样品中柠檬酸含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体×1 支,-20℃保存。
试剂四:粉剂×1 瓶,室温保存。临用前配制,加入 5mL 试剂一,充分溶解。
试剂五:液体×1 瓶,4℃避光保存。
标准品:液体×1 支,250μmol/L 柠檬酸标准液,4℃保存。
样品处理:
1. 液体样品:取 0.1mL 液体加试剂一 0.9mL,充分混匀,11000g, 4℃离心 10min,取上清液待测。
2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。11000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
3. 线粒体:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL试剂一)进行冰浴匀浆,600g/min,4℃离心 5min;取上清至另一 EP 管中,11000g,4℃离心 10min,弃上清(此上清液可用于细胞质 CA 含量测定);向沉淀中加试剂二 200μl,以及试剂三 2μl,充分悬浮溶解,11000g,4℃离心 10min,取上清液待测。
4. 细菌、真菌中:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);11000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 545 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂一置于 30℃水浴中预热 30min。
3. 空白管:取 EP 管,依次加入 100μL 蒸馏水,700μL 试剂一,100μL 试剂四,100μL 试剂五,混匀后室温静置 30min,于 545nm 测定吸光度,记为 A 空白管。

4. 标准管:取 EP 管,依次加入 100μL 标准液,700μL 试剂一,100μL 试剂四,100μL 试剂五,混匀后室温静置 30min,于 545nm 测定吸光度,记为 A 标准管。
5. 测定管:取 EP 管,依次加入 100μL 上清液,700μL 试剂一,100μL 试剂四,100μL 试剂五,充分混匀
后室温静置 30min,于 545nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式:
1. 按液体样品的体积计算
柠檬酸含量(nmol/L)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×样品稀释倍数×V 总= 2500×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准液:250μmol/L=0.25 m mol/L;样品稀释倍数:(0.1 mL 样品+0.9mL 试剂一)÷ 0.1 mL 样品=10;V总:1mL。
2. 按组织质量计算
柠檬酸含量(nmol/g 鲜重)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W= 250×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
C 标准液:250 μ mol/L;V 总:上清液总体积,1.0 mL=0.001 L;W:样品质量,g。
3. 按蛋白含量计算
柠檬酸含量(nmol/mg prot)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]÷Cpr= 250×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
C 标准液:250 μ mol/L=0.25μ mol/mL;Cpr:上清液蛋白质含量,mg/mL。
4. 按细胞数量计算
柠檬酸含量(nmol/104 cell)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷细胞数量= 250×(A 测定管-A 空白管) ÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量
C 标准液:250 μ mol/L;V 总:上清液总体积,1.0 mL=0.001 L;
注意事项:
1. 样品处理等过程均需要在冰上进行。
2. 试剂四需现配现用,配置好的一周内使用完;
3. 试剂五为易致 癌 物 质,实验过程中,需佩戴手套,避免试剂五溅到皮肤上。
4. 柠檬酸提取液不能用于蛋白含量测定,如需测定蛋白含量,需另取组织,使用本公司 BCA 试剂盒进行测定。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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