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线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
1545 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:25管/24样
  • 货号:LM-877326S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-877326S
用途范围 CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 25管/24样
是否进口

线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
CA 是线粒体三羧酸循环的 个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰 CoA 情况,(3)乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。


测定原理:

CA 在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出 CA 的含量。
 
自备仪器和用品: 
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。
 
试剂组成和配制: 
酸性提取液:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。
碱性提取液:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 7.5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 2.5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 7.5mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存;
标准品:液体 1mL×1 支,10μmol/mL 柠檬酸标准液,4℃保存。
线粒体中柠檬酸提取:
称 0.05~0.1g 样品(建议称 0.1g 样本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃离心 5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min 4℃离心 10min,弃上清(取 300μL 该上清液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),取此溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 330nm,蒸馏水调零。
2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。
3、样本测定:

2022111403502835011

柠檬酸含量计算: 
(1)按蛋白浓度计算
柠檬酸含量(μmol/mg prot)=[C 标准管×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管) ×V 样]÷(V 样÷Cpr)=10×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管)÷Cpr蛋白质含量需要另外测定。
(2)按样本鲜重计算
柠檬酸含量(μ mol/g 鲜重)=[C 标准管×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管) ×V 样]÷(W×V样÷V 样总)=10×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管)÷W
C 标准管:标准液浓度,10μmol/mL; V 样:加入反应体系中样本体积:0.3mL;V 样总:加入提取液体积:1mL;Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意: 检测限为 10nmol/mg prot 或 1μmol/g 鲜重。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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