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乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
3500 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-877327S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-877327S
用途范围 苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应,乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

乙酰辅酶 A(Acetyl-CoA)含量测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
乙酰辅酶 A 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶 A 汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化,经过这条通路 氧化生成二氧化碳和水,释放能量用于 ATP 合成。此外,乙酰辅酶 A 是合成脂肪酸,酮体,胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。


测定原理:

苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和 NAD 生成草酰乙酸和 NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶 A 和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶 A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应,乙酰辅酶 A 含量和 NADH 的生成速率成正比,340nm 下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶 A 含量的高低。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 500μL 试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:液体 20μL×1 支,4℃保存。临用前加入 500μL 试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃保存。临用前加入 45mL 试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。
工作液的配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×0.92 m L),将试剂二、三和四按照 1:1:90 的比例混合,或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀(可以测定 48 样);加样前置 37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴锅中预热 30 min;现配现用;
乙酰辅酶 A 的提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。测定步骤1、 分光光度计预热 30min,用蒸馏水于 340nm 处调零。
2、取 920μL 工作液和 100μL 样本至 1mL 石英比色皿,混匀,立即记录 340nm 处 20s 的吸光值 A1 和 80s时的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
乙酰辅酶 A 含量计算:
标准条件下测定的回归方程为 y = 1640x + 0.012;x 为吸光值,y 为标准品浓度(nmol/mL)。
注意:本试剂盒 检测限为 1.6nmol/mL。
(1)按照蛋白浓度计算
乙酰辅酶 A 含量(nmol/mg prot)=[(1640×ΔA+0.012) ×V1]÷(V1×Cpr)=(1640×ΔA+0.012) ÷Cpr需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按照样本质量计算
乙酰辅酶 A 含量(nmol/g 鲜重)=[(1640×ΔA+0.012) ×V1]÷(W×V1÷V2)=(1640×ΔA+0.012) ÷W
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
乙酰辅酶 A 含量(nmol/104)=[(1640×ΔA+0.012)×V1]÷(500×V1÷V2)=(1640×ΔA+0.012)÷500
V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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