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羧酸酯酶(CarE)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
345 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876533S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876533S
用途范围 CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,通过测定萘酯的生成速率即可计算出CarE的活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

羧酸酯酶(carboxylesterase,CarE)活性测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
哺乳动物 CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨酸水解酶家族。CarE 催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE 参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解 毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制 CarE活性。


测定原理:

CarE 能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固蓝显色;在 450 nm 光吸收增加速率,计算 CarE 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 30mL×2 瓶, 4℃保存;
试剂三:粉剂×2 支, 4℃保存,临用前取 1 支试剂三,加 1.2ml 无水乙醇充分溶解;
试剂四:粉剂×2 支,-20℃保存,临用前取 1 支试剂四,加少量试剂二溶解;
工作液配制:临用前配制,向 1 瓶试剂二中,加入溶解后的试剂三和试剂四各 1 支,充分溶解,过滤,4℃避光保存,可用 1 周。
样本的前处理:
1、细菌、细胞样品制备
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 200 万细菌或细胞加入 400μL 试剂一,超声波破碎细
菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000g 4℃离心 30min,取上清液待测。
2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂
一)进行冰浴匀浆;12000g 4℃离心 30min,取上清液待测。
3、液体:直接测定。
测定步骤:
1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 450 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管:取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 5μL 蒸馏水和 1000μL 试剂二,迅速混匀,于 450nm 处测定 3min内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 空白管=A2-A1
4. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 5μL 上清液和 1000μL 试剂二,迅速混匀,于 450nm 处测定 3min内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A3,第 190s 吸光值记为 A4。△A 测定管=A4-A3

注意:空白管只需测定一次。
CarE 活性计算公式:
1 组织中 CarE 活性
(1) 按照蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T= 67×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;V 样:加入上清液体积,0.005 mL;T:反应时间,3min。V 反总:1.005mL;
蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按照样品质量计算
单位的定义:每 g 组织在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷W÷T= 67×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
V 样总:上清液总体积,1 mL;V 样:加入上清液体积(mL),0.005 mL;V 反总:1.005mL;W:样品质量
(g);T:反应时间(min),3min。
2 细菌或细胞中 CarE 活性
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/104 cell)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷细胞密度(104 cell/mL)÷T= 67×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞密度(104 cell/mL)
V 总:上清液总体积,1 mL;V 样:加入上清液体积(mL),0.005 mL;V 反总:1.005mL ;T:反应时间(min),3min。
3. 液体中 CarE 活性
单位的定义:每毫升样品在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/mL )= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷V 样÷T= 67×(△A 测定管-△A 空白管)
V 样总:上清液总体积,1 mL;V 样:加入上清液体积(mL),0.005 mL;V 反总:1.005mL;T:反应时间(min),3min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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