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谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
115 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876530S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876530S
用途范围 GOT催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GOT( 2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT 在心肌细胞中含量 ,临 床 上一般常作为心 肌 梗 塞和心 肌 炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。

测定原理:

GOT 催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与 2,4-二硝基苯肼反应生成 2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定 505nm吸光度的变化,即可计算 GOT 酶活力。需自备的仪器和用品可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:液体 5mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂三:液体 50 mL×1 瓶,4℃保存;
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定操作表
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。
2、 在 EP 管中加入下列试剂

2022111409163163179

2022111409164827554

计算
1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.4768x-0.0013 (x 为标准品浓度,umol/mL;y 为ΔA)。
2、血清(浆)GOT 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0013)÷0.4768÷T×103=104.9×(ΔA+0.0013)
3、细胞、细菌和组织中 GOT 活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0013)÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷Cpr需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.21×(ΔA+0.0013)
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,20min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
1、 标准曲线线性范围为:0.01 umol/mL -2 umol/mL。
2、 ΔA 线性范围为:0.01 -2。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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