谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：
GOT（ 2.6.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT 在心肌细胞中含量 ，临 床 上一般常作为心 肌 梗 塞和心 肌 炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。

测定原理：

GOT 催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与 2,4-二硝基苯肼反应生成 2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定 505nm吸光度的变化，即可计算 GOT 酶活力。需自备的仪器和用品可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体 5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂三：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存；
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定操作表
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。
2、 在 EP 管中加入下列试剂

计算
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.4768x-0.0013 (x 为标准品浓度，umol/mL；y 为ΔA)。
2、血清（浆）GOT 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT（nmol/min/mL）=（ΔA+0.0013）÷0.4768÷T×103=104.9×（ΔA+0.0013）
3、细胞、细菌和组织中 GOT 活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA+0.0013）÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =104.9×（ΔA+0.0013）÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/g 鲜重）=[（ΔA+0.0013）÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =104.9×（ΔA+0.0013）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA+0.0013）÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.21×（ΔA+0.0013）
V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，20min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；103：1umol/mL=103 nmol/mL。
1、 标准曲线线性范围为：0.01 umol/mL -2 umol/mL。
2、 ΔA 线性范围为：0.01 -2。