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谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
105 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-876531S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876531S
用途范围 GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/24样
是否进口

谷丙转氨酶(GPT)活性测定试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞 GPT 活性很高,当肝 细 胞 坏 死,GPT 释放到血液中,血清GPT 活性显著增高。因此,GPT 被 卫生组织推荐为肝 功 能损害最敏感的检测指标。

测定原理:

GPT 催化丙氨酸和 α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入 2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在 505nm 读取吸光值并计算酶活力。
试验中所需的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:液体 5 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂三:液体 50 mL×1 瓶,4℃保存;
样品测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定操作表:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。
2、 在 EP 管中加入下列试剂

2022111409124453928

2022111409130144524

计算:
1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.4228x+0.0003 (x 为标准品浓度,umol/mL;y 为ΔA)。
2、血清(浆)GPT 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GPT(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0003)÷0.4228÷T×103=118.26×(ΔA-0.0003)
3、细胞、细菌和组织中 GPT 活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GPT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =118.26×(ΔA-0.0003)÷Cpr需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GPT(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =118.26×(ΔA-0.0003)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GPT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.236×(ΔA-0.0003)
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,20min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
1、 标准曲线线性范围为:0.01 umol/mL -2 umol/mL。
2、 ΔA 线性范围为:0.01 -2。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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