赖氨酸(lysine，Lys)含量测定试剂盒说明书

测定意义：
赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促 进 人 体 发 育、增 强 免 疫 功 能，并有提高中 枢 神 经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为 限制性氨基酸。

测定原理：

蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的 ε-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有—个游离氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制标准液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 12.5mL 试剂三充分溶解混匀；
试剂二：液体 12.5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：60%乙醇，自备。
赖氨酸提取：
样本烘干粉碎，称取约 0.01g 样本，加入 1mL 提取液，充分匀浆。80℃水浴提取 20min，冷却后 10000g 离心 10min，取上清待测。
测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。
2、 工作液的配制：取 10mL 试剂一与 10mL 试剂二混合摇匀，取上清备用。用不完的试剂 4℃保存。
3、 在有盖 EP 管中加入下列试剂：

混匀，取 1000μL 至 1mL 玻璃比色皿中，于 530nm 波长处记录吸光值 A。△A=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。
赖氨酸含量计算：
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0062x - 0.0212；x 为赖氨酸含量（μg/mL），y 为吸光值。
1. 按照蛋白浓度计算
赖氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照样本质量计算
赖氨酸含量(μg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1.1515，校正系数。