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脯氨酸脱氢酶(ProDH)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1545 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876505S
  • 发布日期: 2022-11-14
  • 更新日期: 2022-11-14
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876505S
用途范围 利用异硫氰酸甲酯检测ProDH催化的脱氢反应,600nm处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

脯氨酸脱氢酶( Proline dehydrogenase,ProDH)试剂盒说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
ProDH 是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布最广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸,降低 ProDH 活性对于调 节 渗 透 平 衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清 除 自 由 基、保护细胞结构具有重要意义。

测定原理:

利用异硫氰酸甲酯检测 ProDH 催化的脱氢反应,600nm 处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 2 mL×1 支, 4℃保存;
试剂二:液体 25mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存;
试剂四:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保存;
试剂五:粉剂×4 支,4℃保存;

粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆,1500g 4℃离心 15min,取上清液于一支新的 EP 管中,加入一滴试剂一(用 10μL 的枪头加入),涡旋混匀,冰浴放置 30min 后,16000g 4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 600nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)混合液的配制:首先将试剂三和试剂四配成溶液(见试剂的组成和配制),临用前根据用量按照试剂二(V):试剂三(V):试剂四(V)=2.4(mL):0.3(mL):0.3(mL)的比例充分混匀。(注意:现配现用,用多少配多少),置于 30℃水浴 5min;
(2)试剂五的配制:取试剂五一支,临用前加入 500μL 蒸馏水充分溶解待用,现配现用。
(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 35μL 样本、15μL 试剂五和 150μL 混合液,混匀,立即记录600nm 处初始吸光值 A1 和 10min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。
ProDH 活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
ProDH(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
ProDH(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,0.2mL; V 样:加入样本体积,0.035mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活力单位。
ProDH(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.005÷T =114.29×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 600nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活力单位。
ProDH(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.005÷T =114.29×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,0.2mL;V 样:加入样本体积,0.035mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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